利用脫毒的慢病毒進行過表達載體的構(gòu)建，構(gòu)建完成的載體通過多引物PCR驗證和測序驗證，結(jié)果良好，序列無突變發(fā)生。

在明確轉(zhuǎn)導滴度為25時轉(zhuǎn)導細胞效率最高的基礎(chǔ)上，利用嘌呤霉素進行陽性細胞藥篩，去除假陽性細胞。連續(xù)傳代驗證發(fā)現(xiàn)誘導組的細胞已經(jīng)突破生理極限，突破了“Hay flick”界限（細胞最大分裂次數(shù)），證明本研究中的細胞永生化誘導取得初步成功。

流式細胞術(shù)鑒定陽性細胞純化程度

分別在誘導細胞加入嘌呤霉素的第2，4，6天時進行流式細胞術(shù)的細胞鑒定，檢測陽性細胞的藥篩效率，發(fā)現(xiàn)隨著時間的延長，陽性細胞的比例不斷上升，第6天時陽性細胞比例為100%（存在極少數(shù)的陰性細胞在圈門外，比例接近于0），陰性細胞已通過嘌呤霉素全部篩除。

細胞核型分析

對誘導后傳代50代的細胞進行染色體核型分析發(fā)現(xiàn)，1號染色體中央著絲粒和次縊痕染色深，2號染色體短臂有4條深帶，長臂有6～7條深帶，分3個區(qū)；3號染色體著絲粒染色濃，在短臂和長臂的中端各有1條明顯寬闊的淺帶；其它染色體從形態(tài)、長度和臂比上看均未產(chǎn)生顯著的異變。

在永生化誘導的細胞中hnRNP A2蛋白的表達與端粒酶活性呈正相關(guān)，hnRAP A2的表達促進了端粒的延長。此外，在成體細胞中，端粒酶是無法被檢測到的，而在本誘導細胞株中，可以檢測到端粒酶的表達，證明細胞的誘導成效顯著。

細胞培育肉作為一門新興科學技術(shù)，雖然研究時間相對較短，但是其作為細胞生物學、組織工程學及食品科學等多學科交叉融合的技術(shù)已經(jīng)具備深厚的研究基礎(chǔ)。在細胞培育肉研發(fā)過程中，獲得相應的可以無限增殖的成體細胞，是解決其工業(yè)化過程中細胞來源的重要保障。

在基因水平層面，細胞永生化的方法目前主要有SV40大T抗原法、端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶法、HPV16 E6法、原癌基因以及抑癌基因等方法。這些細胞永生化的方法各有利弊，作為食品科學研究，細胞培育肉使用的種子細胞首先需要排除人源因素，同時保證細胞的活性及各項功能，更重要的是細胞永生化的誘導不能干擾了各類種子細胞的正常使用，即不能引入不確定因素。

王守偉 教授級高級工程師

中國肉類食品綜合研究中心 首席科學家

北京食品科學研究院 首席科學家