報(bào)告標(biāo)題

低共熔溶劑( DES )是一種新興的綠色溶劑，可替代傳統(tǒng)有機(jī)溶劑用于蛋白質(zhì)的提取。然而，低共熔溶劑的高黏度限制了體系內(nèi)的傳質(zhì)，阻礙了工業(yè)化應(yīng)用。改變水含量可以顯著降低粘度，避免局限性。此外，加水可能會影響DES-水混合物的理化性質(zhì)，從而影響蛋白質(zhì)提取的效果。基于ChCl/G的DES體系，采用響應(yīng)面法對5個變量進(jìn)行優(yōu)化；采用課題組前期研究的ChCl/G摩爾比(w/w)、提取溫度(℃)、時間(h)、料液比(w/w)和含水量(w/w)。本研究采用DES體系中的含水量，范圍為0-50%(w/w)，作為單因素實(shí)驗(yàn)。利用建立的方法對提取的蛋白質(zhì)進(jìn)行了蛋白質(zhì)得率(PY)、蛋白質(zhì)含量(PC)、功能特性、熱穩(wěn)定性、二級結(jié)構(gòu)變化和蛋白質(zhì)分子量分布的評價(jià)。水分的添加對蛋白質(zhì)得率PY影響顯著，當(dāng)水分含量增加0-50%(w/w)時，蛋白質(zhì)得率PY從（31.14±3.07）%增加到（55.50±2.40）%。然而，蛋白質(zhì)含量PC在含水量達(dá)到40 % ( 92.12% ~ 96.00%)時顯著增加，隨后下降。在50%含水量下獲得的分離蛋白在pH7（（78.15±1.27）%）和pH9（（98.63±0.75）%）下的溶解度均顯著較高，而在pH3時，在0%含水量下的溶解度最低（（22.07±1.77）%）。在所研究的各個水平上，成形性能沒有顯著差異。然而，當(dāng)加水量為60%時，乳化活性指數(shù)顯著提高（（52.38±0.95）m²/g）。熱力學(xué)數(shù)據(jù)表明，在50%水量下，其熱穩(wěn)定性顯著提高（（29.12±4.07）J/g）。α-螺旋結(jié)構(gòu)所占比例在各級中均較為突出，隨著含水量的增加而減少。從分子結(jié)構(gòu)來看，加水量大于20%時，63 kDa的多肽條帶和35 kDa的豆球蛋白(酸性亞基)條帶略有解體。水的加入對蠶豆分離蛋白的蛋白質(zhì)得率PY、結(jié)構(gòu)和功能特性有顯著影響。因此，優(yōu)化DES的水替代是保持其物理化學(xué)性質(zhì)的必要條件。