目的:建立草莓中甲型肝炎病毒(hapatitis A virus,HAV)的有效富集方法及病毒RNA提取方法,用于草莓中HAV檢測。方法:利用甲肝減毒疫苗對已知陰性的草莓樣品進(jìn)行人工污染,通過有效富集條件的優(yōu)化及RNA提取后,采用實時熒光逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)進(jìn)行檢測。結(jié)果:病毒富集選擇Tris-甘氨酸-1 g/100 mL牛肉浸提物緩沖液洗脫、果膠酶30 U、氯仿-正丁醇為抑制劑去除劑、聚乙二醇沉淀、5 ℃孵育1 h等優(yōu)化條件,檢測靈敏度較高;最優(yōu)RNA提取方法為美國ABI公司生產(chǎn)的RNA提取試劑盒。采用優(yōu)化后的方法對草莓樣品中HAV病毒的檢測顯示,該病毒粒子的檢測靈敏度可以達(dá)31.36 CCID50/20 g樣品。同時對50 份送檢樣品進(jìn)行檢測,結(jié)果均為陰性。結(jié)論:所建立的病毒富集方法和核酸提取方法更適合草莓樣品中HAV的檢測,靈敏度較高。
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