施氏假單胞菌(Pseudomonas stutzeri)F4能產(chǎn)生黃曲霉毒素B1的降解酶(aflatoxin B1-degrading enzyme,ADE),本實驗通過3 步法提取純化ADE,即包括硫酸銨分級沉淀、DEAE-Sepharose陰離子交換柱層析和SephadexG-100凝膠過濾層析。結果表明,通過以上純化方法,ADE的回收率為56%,純化的ADE比活力為6.4×104 U/mg,純化了123 倍。利用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳測得ADE分子質(zhì)量約為24 kD;ADE與AFB1反應的最適溫度和pH值分別為30 ℃和6.0;Cu2+對ADE酶活性有抑制作用;利用雙倒數(shù)作圖法測得ADE表觀Km值為5.61×10-5 mol/L。
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