為建立高原牦牛背最長肌蛋白質(zhì)雙向電泳的最佳條件,以牦牛背最長肌為研究對象,比較了超高速離心法、三氯乙酸-丙酮法、Tris-酚法及雙裂解法4 種方法對總蛋白質(zhì)的提取效果。凝膠采用快速銀染法染色,經(jīng)雙向電泳,用ImageMaster 2D Platinum軟件分析蛋白點(diǎn),并通過質(zhì)譜對分離的蛋白點(diǎn)進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明:超高速離心法提取的樣品蛋白質(zhì)量濃度最高,雜質(zhì)最少,蛋白點(diǎn)分離程度最好,蛋白點(diǎn)拖尾及產(chǎn)生縱橫條紋的現(xiàn)象不明顯,獲得531 個(gè)蛋白點(diǎn),數(shù)量最多。該方法比其他3 種方法更簡單快捷,耗時(shí)最短,僅需2.5 h,而另3 種方法至少需4~6 h甚至過夜反應(yīng)。隨機(jī)選取的6 個(gè)蛋白點(diǎn)鑒定為5 種蛋白,分別為肌球蛋白調(diào)節(jié)輕鏈2(1、2號點(diǎn)為同一蛋白)、脂肪酸結(jié)合蛋白、蘋果酸脫氫酶、葡萄糖磷酸變位酶1、過氧化物氧還酶-1。本實(shí)驗(yàn)成功建立了牦牛肉雙向電泳分析方法。
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