領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）法從蠟狀芽孢桿菌（Bacillus cereus）中擴(kuò)增了β-環(huán)糊精葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶（β-cyclodextrin glucanotransferase，β-CGTase）基因，將該基因克隆到pBV220質(zhì)粒中，轉(zhuǎn)化E.coli DH5α，經(jīng)氨芐青霉素抗性篩選和酶切驗(yàn)證后，得到能表達(dá)β-CGTase的重組大腸桿菌E.coliDH5α/pBVcgt。通過對(duì)工程菌產(chǎn)酶條件的優(yōu)化，得到最佳產(chǎn)酶條件為：OD600 nm值達(dá)到1.0、初始培養(yǎng)溫度30 ℃、發(fā)酵培養(yǎng)基初始pH 8.0、溫度梯度誘導(dǎo)39 ℃培養(yǎng)0.5 h，40 ℃培養(yǎng)0.5 h，41 ℃培養(yǎng)1 h，42 ℃培養(yǎng)2 h。酶活力由優(yōu)化前的445 U/mL提高到956 U/mL，酶活力提高了1.15 倍。溫度梯度誘導(dǎo)比直接誘導(dǎo)酶活力提高20%。該酶的克隆表達(dá)以及發(fā)酵條件的研究表明，該酶能在大腸桿菌原核表達(dá)體系中高效表達(dá)。
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