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碎囊毛霉產(chǎn)β-1,3-1,4-葡聚糖酶的分離純化及其酶學(xué)性質(zhì)
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 135 發(fā)表時間: 2017-06-07
作者: 丁葉梅,贠建民,魏 龍,陳 芳,艾對元,張紊瑋
關(guān)鍵詞: 碎囊毛霉;β-1,3-1,4-葡聚糖酶;分離純化;酶學(xué)性質(zhì)
摘要:

基于碎囊毛霉M-28固態(tài)發(fā)酵方式,采用單因素試驗對其所產(chǎn)β-1,3-1,4-葡聚糖酶進行提取純化條件優(yōu)化,并開展部分酶學(xué)性質(zhì)研究。結(jié)果表明:用pH 5.5的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液在200 r/min浸提固態(tài)發(fā)酵基質(zhì)30 min,所得粗酶液經(jīng)飽和度80%硫酸銨鹽析、24 h透析濃縮、Sephadex G-100柱層析分離后,經(jīng)紫外分光光度計檢測,得到2 個蛋白峰,酶活力測定發(fā)現(xiàn)有一個峰具有酶活性,收集該酶活組分并采用聚乙二醇高度吸附濃縮,再用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳法進行純度檢驗,純化酶蛋白呈單一譜帶,分子質(zhì)量約為17.2 kD,酶比活力達到225.02 U/mg,純度較粗酶液提高了2.48 倍。酶的最適反應(yīng)溫度為55 ℃、在40~50 ℃時相對穩(wěn)定,其最適pH值為5.5、酶活力在pH 4.5~5.5條件下相對穩(wěn)定。Fe3+和Al3+對該酶具有明顯抑制作用,F(xiàn)e2+對其有激活作用,其他金屬離子影響不大。

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