為篩選特異性強(qiáng)、親和力高、可夾心配對(duì)單克隆抗體4A2和5C12,通過(guò)方陣試驗(yàn)優(yōu)化工作條件,建立金黃色葡萄球菌腸毒素(staphylococcal enterotoxins,SEs)的雙抗體夾心-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)定量檢測(cè)方法。結(jié)果表明:該方法標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=4.074x-1.1888,R2=0.9892,檢測(cè)下限為0.307μg/mL,批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于10%,脫脂乳粉中SEs摻入試驗(yàn)測(cè)定回收率為103%~107%,特異性、重復(fù)性和穩(wěn)定性良好;應(yīng)用所建雙抗體夾心-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法,對(duì)數(shù)株葡萄球菌分離株體外培養(yǎng)上清中SEs產(chǎn)生的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行分析表明,不同菌株SEs分泌能力不同,且0~20h分泌量不斷增加,對(duì)鮮牛乳和豬淋巴組織勻漿中的SEs進(jìn)行檢測(cè),檢出率分別為51.7%和59.1%,并與進(jìn)口商品化試劑盒檢測(cè)結(jié)果比對(duì),一致率達(dá)92.5%,表明食品中SEs污染的普遍存在。所建方法靈敏高效,可為食源性污染監(jiān)控提供有效手段。
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