目的:為快速檢測(cè)蝦產(chǎn)品中的活副溶血性弧菌,建立一種實(shí)時(shí)熒光跨越式滾環(huán)等溫?cái)U(kuò)增(real-time fluorescent saltatory rolling circle amplification,RF-SRCA)與疊氮溴化丙錠(propidium monoazide,PMA)染料相結(jié)合的檢測(cè)方法。方法:依據(jù)副溶血性弧菌的特異性基因toxR設(shè)計(jì)并篩選引物,對(duì)PMA-RF-SRCA檢測(cè)方法進(jìn)行特異性、靈敏度及檢出限分析,并與PMA-實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)方法進(jìn)行對(duì)比。對(duì)76 份樣品進(jìn)行檢測(cè),以GB 4789.7—2013方法為標(biāo)準(zhǔn),對(duì)PMA-RF-SRCA方法的相對(duì)敏感性、相對(duì)特異性、相對(duì)符合率進(jìn)行計(jì)算,以對(duì)本方法的實(shí)用性進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果:此方法的引物特異性良好,12?株副溶血性弧菌結(jié)果均呈陽(yáng)性,18?株非副溶血性弧菌結(jié)果均呈陰性;PMA-RF-SRCA法靈敏度為3.2×100?CFU/mL,檢出限為2.08×101?CFU/g,此方法的靈敏度是PMA-real-time PCR的100?倍。經(jīng)過實(shí)際樣品檢測(cè),PMA-RF-SRCA方法的敏感性、特異性、符合率分別為100.00%、96.00%和98.68%。結(jié)論:PMA-RF-SRCA方法特異性強(qiáng)、靈敏度高,可用于蝦產(chǎn)品中的活副溶血性弧菌的檢測(cè)與篩查。
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