為研究新型酪蛋白源抗菌肽BCp12對金黃色葡萄球菌的抑菌機(jī)理,本實(shí)驗(yàn)通過酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀、透射電子顯微鏡分析BCp12對金黃色葡萄球菌的壁膜損傷機(jī)制;采用熒光光譜、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳研究BCp12對菌體DNA結(jié)合及蛋白質(zhì)合成的影響;利用賴氨酸乙酰化、琥珀酰化、2-羥基異丁酰化、丙二酰化4 種泛抗體結(jié)合免疫印跡分析BCp12對菌體蛋白翻譯后修飾的影響。結(jié)果表明:BCp12的最小抑菌質(zhì)量濃度(minimum inhibitory concentration,MIC)為2 mg/mL,經(jīng)質(zhì)量濃度超過MIC的BCp12處理后的菌體細(xì)胞膜疏水性顯著下降(P≤0.001),通透性增加,菌體形變嚴(yán)重,部分細(xì)胞內(nèi)容物外泄形成空腔;BCp12與溴化乙錠競爭性結(jié)合菌體DNA,使核酸合成受到抑制,胞內(nèi)蛋白質(zhì)量濃度顯著下降(P≤0.001),特別是分子質(zhì)量為15~35 kDa的蛋白變化最為明顯,說明BCp12可抑制菌體蛋白質(zhì)的合成;金黃色葡萄球菌蛋白存在大量的賴氨酸乙酰化、琥珀酰化、丙二酰化修飾,經(jīng)BCp12處理的菌體賴氨酸丙二酰化修飾水平明顯下調(diào),而對賴氨酸琥珀酰化和2-羥基異丁酰化修飾的影響不明顯。本實(shí)驗(yàn)揭示了BCp12對金黃色葡萄球菌的多靶點(diǎn)抑菌機(jī)制,對新型乳源抗菌肽的應(yīng)用和保障食品安全具有一定的意義。
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