以Trp 為熒光探針,測定Aspergillus ficuum 產(chǎn)內(nèi)切菊粉酶和外切菊粉酶的內(nèi)源熒光性質(zhì),結(jié)果表明,外切菊粉酶和內(nèi)切菊粉酶熒光產(chǎn)生貢獻(xiàn)的色氨酸殘基可能位于一個(gè)極性環(huán)境中,內(nèi)切菊粉酶的色氨酸殘基所處環(huán)境的極性比外切菊粉酶的色氨酸殘基所處的環(huán)境極性大。菊粉酶經(jīng)N- 溴代琥珀酰亞胺(NBS)修飾后,內(nèi)切菊粉酶熒光發(fā)射峰位出現(xiàn)了明顯的藍(lán)移,表明內(nèi)切菊粉酶分子的色氨酸比外切菊粉酶分子的色氨酸對環(huán)境的變化更敏感。以丙烯酰胺作為熒光淬滅劑,內(nèi)切菊粉酶色氨酸的可及分?jǐn)?shù)比外切菊粉酶色氨酸的可及分?jǐn)?shù)大,說明內(nèi)切菊粉酶分子中的色氨酸比外切菊粉酶的更加暴露。菊粉酶在不同的pH 值環(huán)境中熒光強(qiáng)度的變化結(jié)果顯示:隨著環(huán)境pH 值的降低,內(nèi)切菊粉酶的熒光淬滅程度比外切菊粉酶大,表明內(nèi)切酶分子中色氨酸的微環(huán)境對pH 值的變化更敏感。熒光光譜分析揭示了內(nèi)切菊粉酶和外切菊粉酶具有不同的構(gòu)象。
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