根據(jù)大腸桿菌O157(Escherichia coli O157,E. coli O157)的志賀樣毒素基因slt和“黏附抹平”因子eaeA基因、單核增生李斯特氏菌(Listeria monocytohenes,LM)的編碼溶血素O的hlyA基因和毒力基因plcA,分別設(shè)計(jì)上游和下游的slt、eaeA、hlyA和plcA四對引物,對應(yīng)擴(kuò)增片段依次為780、450、708、600bp。通過對單管多重PCR(multiplex PCR,MPCR)擴(kuò)增的特異性、敏感性分析以及對單管多重PCR擴(kuò)增條件,如Mg2+濃度、dNTPs濃度和退火溫度等的優(yōu)化,建立快速檢測大腸桿菌O157和單增李斯特菌的多重PCR方法,該方法能同時(shí)檢測到0.50ng的E. coliO157和單增李斯特菌基因組DNA,并且操作簡便、快速,具有良好的敏感性和特異性,能夠快速實(shí)現(xiàn)對食品中多種致病菌的診斷和監(jiān)控。
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