在采用浮選與溶劑萃取相結(jié)合方法的基礎(chǔ)上,使用FTA 濾膜從鮮肉中提取沙門氏菌的DNA,消除PCR反應(yīng)的抑制因子。以沙門氏菌編碼吸附和侵襲上皮細(xì)胞表面蛋白的invA 基因?yàn)榘谢颍?jīng)過PCR 擴(kuò)增得到376bp的產(chǎn)物,經(jīng)過DNA 測(cè)序證實(shí)該產(chǎn)物為目的擴(kuò)增產(chǎn)物。使用FTA 濾膜處理樣品,再通過PCR 方法檢測(cè)沙門氏菌,豬肉、牛肉、羊肉、雞肉勻漿液的檢出限均為7 × 101CFU/ml,可在6h 內(nèi)完成對(duì)肉中沙門氏菌的檢測(cè),比目前普遍采用的先增菌再進(jìn)行PCR 檢測(cè)的方法縮短了12~24h。實(shí)際檢測(cè)了72 份樣品,同時(shí)與GB/T 4789.4 - 2003 方法做比較,本方法的檢出率為27.8%,檢出時(shí)間為6h;GB/T 4789.4 - 2003 方法檢出率為22.2%,檢出時(shí)間為5d。結(jié)果表明:FTA 濾膜用于PCR 檢測(cè)肉中沙門氏菌檢出率高、耗時(shí)短。使用FTA 濾膜法制備模板DNA,為食品中的致病菌快速檢測(cè)構(gòu)建了一個(gè)技術(shù)平臺(tái)。
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