目的:在產(chǎn)琥珀酸放線桿菌主要酶活分析基礎(chǔ)上選育出高產(chǎn)突變株對工業(yè)規(guī)模生物轉(zhuǎn)化農(nóng)作物秸稈制備琥珀酸具有重要意義。方法:采用酸解方法處理原料秸稈并利用高效液相檢測降解糖分,在菌株主要酶活分析及調(diào)控的基礎(chǔ)上,利用軟X 射線誘變結(jié)合丙烯醇抗性平板進(jìn)行定向選育以降低乙醇流量,并對代謝酶活進(jìn)行了分析。結(jié)果:秸稈水解液的檢測表明200g 的秸稈干粉酶解得約47g 的葡萄糖和約26g 的木糖,酶活分析表明,Pepck、Pc及Mdh 是琥珀酸合成重要代謝酶且酶活可調(diào)控,發(fā)現(xiàn)乙醇脫氫酶(Adh)的高酶活造成了大量副產(chǎn)物乙醇的生成。篩選出的丙烯醇抗性突變株S.JST01 的乙醇產(chǎn)量由8.9g/L 降為1.4g/L,降低了84%,而琥珀酸流量產(chǎn)量由54.2g/L 升至63.1g/L,升高了16%。酶活檢測表明Adh 的酶活力單位從614U 降低到108U。結(jié)論:圍繞產(chǎn)琥珀酸放線桿菌Adh酶活降低實(shí)施定向選育有助于提高琥珀酸的流量,突變株的末端產(chǎn)物琥珀酸累積達(dá)63.1g/L,具有工業(yè)應(yīng)用潛力。
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