本研究運(yùn)用超濾與凝膠層析等分離純化技術(shù)逐級(jí)分離麥胚清蛋白中性蛋白酶酶解產(chǎn)物,以氧化自由基吸收能力(oxygen radical absorbance capacity,ORAC)與2,2’-聯(lián)氮雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonicacid),ABTS)陽離子自由基清除率為評(píng)價(jià)指標(biāo),篩選具有較高抗氧化活性的產(chǎn)物組分,并以該組分為研究對(duì)象,利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜結(jié)合PeptideRanker數(shù)據(jù)庫活性預(yù)測(cè)技術(shù)篩選出具有高抗氧化活性的小肽,并通過高糖誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)及H2O2誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞與VSMCs建立細(xì)胞氧化應(yīng)激模型,評(píng)價(jià)小肽對(duì)細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。結(jié)果表明,經(jīng)超濾與層析篩選出分子質(zhì)量較小的V組分抗氧化活性最高,液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜鑒定出該組分主要由20?個(gè)小肽組成,PeptideRanker預(yù)測(cè)與抗氧化實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)肽序列LNYPPY(765.3?Da)抗氧化活性最高(ORAC?3.01?μmol TE/μmol)、ABTS陽離子自由基清除率95.58%)。肽序列LNYPPY對(duì)H2O2誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞和VSMCs氧化損傷具有很好的保護(hù)作用,但對(duì)高糖誘導(dǎo)的VSMCs異常增殖以及活性氧水平上升無明顯影響。綜上,肽LNYPPY具有良好的體外抗氧化活性,且對(duì)H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化損傷具有保護(hù)作用,研究可為麥胚清蛋白的開發(fā)利用提供重要的理論參考。
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