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可視化跨越式滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)檢測(cè)食品中單核細(xì)胞增生李斯特氏菌
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 192 發(fā)表時(shí)間: 2021-08-31
作者: 苑寧,張?zhí)N哲,張海娟,于澤,盧鑫,張偉
關(guān)鍵詞: 跨越式滾環(huán)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù);單核細(xì)胞增生李斯特氏菌;hlyA基因;檢測(cè);可視化
摘要:

建立一種新型的單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢測(cè)方法,即通過可視化跨越式滾環(huán)等溫?cái)U(kuò)增(saltatory rolling circle amplification,SRCA)技術(shù)檢測(cè)單核細(xì)胞增生李斯特氏菌。根據(jù)單核細(xì)胞增生李斯特氏菌hlyA基因序列設(shè)計(jì)引物,進(jìn)行特異性驗(yàn)證,對(duì)靈敏度和人工污染樣品的檢出限進(jìn)行測(cè)定。通過檢測(cè)70?種實(shí)際食品樣品對(duì)SRCA方法的敏感性、特異性和符合率進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果表明:所有單核細(xì)胞增生李斯特氏菌呈陽(yáng)性結(jié)果,非單核細(xì)胞增生李斯特氏菌呈陰性結(jié)果,說明該方法特異性良好。SRCA方法的靈敏度為8.9×100?fg/μL,是傳統(tǒng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)方法的1?000?倍,檢出限為2.8×100?CFU/g,是傳統(tǒng)PCR方法的1/1?000。在實(shí)際樣品的檢測(cè)中,SRCA方法與GB?4789.30—2016《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)?單核細(xì)胞增生李斯特氏菌》方法進(jìn)行比較,其敏感性、特異性和符合率分別為100%、97.01%和97.14%。可視化SRCA技術(shù)具有操作簡(jiǎn)便、設(shè)備簡(jiǎn)單、特異性強(qiáng)、靈敏度高、檢出限低、檢測(cè)成本低等優(yōu)點(diǎn),適合在基層單位和中小型食品企業(yè)中推廣應(yīng)用。

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