為了開(kāi)發(fā)一種有效的重組牙鲆生長(zhǎng)激素(r-fGH)的方法,利用PCR的方法從牙鲆cDNA文庫(kù)中克隆得到了牙鲆生長(zhǎng)激素(fgh)的cDNA片斷。接著將這個(gè)fgh片斷克隆到整合型質(zhì)粒pAO815,它可以在甲醇誘導(dǎo)啟動(dòng)子的調(diào)控下表達(dá)外源蛋白。利用這種包含一個(gè)fgh插入片段的克隆來(lái)構(gòu)建含有2個(gè)和3個(gè)頭尾順序排列的fgh表達(dá)框的表達(dá)質(zhì)粒。利用氯化鋰轉(zhuǎn)化的方法將所構(gòu)建的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到畢赤酵母GS115,然后進(jìn)行篩選、培養(yǎng)和0.5%甲醇誘導(dǎo)表達(dá),最后得到重組表達(dá)的牙鲆生長(zhǎng)激素。
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