目的:利用培養(yǎng)基覆蓋二維薄層色譜生物自顯影技術(shù)(2D-TLC bioautography)快速檢測、追蹤金錢松內(nèi)生真菌抗細(xì)菌活性成分。方法:以二維薄層色譜將金錢松內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物樣品展開,以枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)為指示菌,氯化三苯四氮唑(TTC)為顯色劑,采用培養(yǎng)基覆蓋生物自顯影技術(shù)對其抗細(xì)菌活性成分進(jìn)行檢測、追蹤。結(jié)果:該方法展開系統(tǒng)篩選簡單,抑菌斑位置準(zhǔn)確、斑點(diǎn)清晰,其優(yōu)化條件為:以乙酸乙酯:正己烷(3:7)為弱極性展開系統(tǒng),甲醇:二氯甲烷(1:9)為強(qiáng)極性展開系統(tǒng),用20%甘油濾紙對濕室保濕,以14h菌齡的枯草芽孢桿菌為指示菌種子液,自顯影薄層板36℃培養(yǎng)14~18h,1%TTC顯色時間為1~2h,含0.2%~0.6%瓊脂的半固體肉湯培養(yǎng)基應(yīng)使用混菌法生物自顯影,含1%瓊脂半固體肉湯培養(yǎng)基應(yīng)使用涂布法生物自顯影。結(jié)論:培養(yǎng)基覆蓋二維薄層色譜生物自顯影技術(shù)是一種快速檢測、追蹤抗菌活性成分的方法,尤其適用于成分復(fù)雜的天然產(chǎn)物中抗菌成分研究。
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