本研究利用RNAi技術(shù),通過RT-PCR方法克隆出水稻淀粉分支酶sbe3基因片斷,經(jīng)兩步組裝法將sbe3基因片斷分別正向、反向組裝入pRNAi-ubi,成功構(gòu)建sbe3基因RNAi轉(zhuǎn)化載體pRNAi-ubi/sbe3。在農(nóng)桿菌介導(dǎo)下,對粳稻中花11未成熟胚誘導(dǎo)的愈傷組織進(jìn)行轉(zhuǎn)化,通過PCR、Southern雜交鑒定獲得一批轉(zhuǎn)基因植株。半定量RT-PCR鑒定出轉(zhuǎn)化苗T1代種子中sbe3基因表達(dá)被明顯抑制,但只引起轉(zhuǎn)基因水稻胚乳中直鏈淀粉含量少量的提高,說明采用RNAi僅沉默sbe3基因?qū)λ九呷橹辨湹矸酆繘]有顯著影響。
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