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噬夏孢歐文氏菌(Erwinia uredovora)類胡蘿卜素合成相關(guān)基因crtE的克隆及其在大腸桿菌中的表達(dá)
來(lái)源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 119 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 汪靖超, 孫東平, 杜桂彩, 郭道森, 李榮貴
關(guān)鍵詞: 噬夏孢歐文氏菌; crtE; GGPP合成酶; 表達(dá); 純化;
摘要:

噬夏孢歐文氏菌基因crtE編碼GGPP合成酶。通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得crtE基因,克隆進(jìn)表達(dá)載體,構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒pET-15bcrtE。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3),構(gòu)建工程菌;重組GGPP合成酶在大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)了高效表達(dá),表達(dá)量占菌體總蛋白的42%。重組蛋白以包含體形式存在,包含體經(jīng)洗滌、尿素溶解、復(fù)性并經(jīng)鎳離子親和層析樹(shù)脂純化,得到了電泳純的重組噬夏孢歐文氏菌GGPP合成酶,帶有His-tag的該蛋白分子量為34kDa,pI值為6.3。

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