本研究采用堿性絲氨酸蛋白酶和蛋白酶II對大豆分離蛋白進(jìn)行兩步定向酶切,以制備具有改善肝昏迷生物活性的高F值寡肽。通過研究,確立了堿性絲氨酸蛋白酶和蛋白酶II定向酶切大豆分離蛋白的最適溫度(T)、pH、底物濃度[S]、酶濃度和底物濃度比[E]/[S]等參數(shù),并在此技術(shù)參數(shù)的基礎(chǔ)上,設(shè)定兩種定向酶切的技術(shù)路線,即在酶切過程中維持堿性絲氨酸蛋白酶最適pH的時(shí)間分別設(shè)定為3.5h(技術(shù)路線I)和30min(技術(shù)路線II),而蛋白酶II定向酶切大豆分離蛋白的技術(shù)參數(shù)不變。結(jié)果表明,技術(shù)路線I、II蛋白質(zhì)回收率分別為87.0%、89.0%;蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化率分別為89.1%、90.5%;酸溶性氮得率分別為90.1%、90.6%;灰分含量分別為9.1%、5.9%;技術(shù)路線I分子量在500~610的肽含量為80.5%、技術(shù)路線Ⅱ分子量在450~650的肽含量為82.0%。研究結(jié)果表明,技術(shù)路線II的酶切效果優(yōu)于技術(shù)路線I。
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