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雙抗夾心ELISA檢測食品中大腸桿菌O157:H7方法研究
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 121 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 葛萃萃, 鐘青萍, 張旺, 歐陽鑫
關(guān)鍵詞: 大腸桿菌O157:H7; 雙抗夾心ELISA; 檢測;
摘要:

研究獲得純化抗大腸桿菌O157:H7IgY抗體,經(jīng)檢測10mg/ml純化IgY抗體的效價(jià)為1:320;以大腸桿菌O157:H7免疫新西蘭大耳白兔,獲得兔抗大腸桿菌O157:H7IgG抗體,效價(jià)達(dá)1:25600。以兔抗大腸桿菌O157:H7IgG抗體稀釋3200倍作為捕獲抗體,抗大腸桿菌O157:H7IgY抗體為檢測抗體建立雙抗夾心ELISA方法檢測大腸桿菌O157:H7,正交試驗(yàn)分析表明,捕獲抗體于37℃包被2h、不封閉、抗原與捕獲抗體于37℃結(jié)合2h、檢測抗體濃度為0.25mg/ml、與抗原于37℃結(jié)合1h為最優(yōu)反應(yīng)條件。該方法對純培養(yǎng)菌液檢出限為105CFU/ml,具有良好的敏感性及特異性。染菌樣品經(jīng)在EC增菌液中選擇性培養(yǎng)后進(jìn)行雙抗夾心ELISA檢測,接種量為0.1~1CFU/g(ml)的樣品在培養(yǎng)12h后可檢出陽性反應(yīng),1~10CFU/g(ml)的樣品在培養(yǎng)8h后可檢出陽性反應(yīng)。

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