PCR擴(kuò)增得到微小毛霉凝乳酶結(jié)構(gòu)基因并測(cè)定其核苷酸序列,用DNAman軟件分析其核苷酸序列及推衍得到的多肽序列,結(jié)果表明擴(kuò)增得到的片段為凝乳酶基因。構(gòu)建了重組菌Pichia pastoris KM71/PIC9K-mcp,通過(guò)G418抗性篩選得到具有多拷貝基因的整合重組菌MK3。用甲醇誘導(dǎo)進(jìn)行初步發(fā)酵試驗(yàn),測(cè)得重組菌MK3酶活為5.4U/ml。
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