通過研究不同質(zhì)量濃度(1、5、10、15、20?g/L)亞牛磺酸(hypotaurine,HTU)對南美白對蝦多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)活性的影響,判斷HTU的抑制類型并測定抑制常數(shù),同時通過測定PPO蛋白的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)、圓二色譜、表面疏水性以及內(nèi)源熒光光譜研究HTU對PPO構(gòu)象的影響。結(jié)果表明HTU能抑制PPO活性,當(dāng)其質(zhì)量濃度為20?g/L時,能抑制79.38%的酶活性,最大半數(shù)抑制濃度(half-maximal inhibitory concentration,IC50)為16.09?g/L。Lineweaver-Burk雙倒數(shù)作圖的結(jié)果顯示Vmax不變,Km增大,推測HTU是競爭性抑制劑的一種,其抑制常數(shù)KI為0.445?mmol/L。隨著HTU質(zhì)量濃度的增大,SDS-PAGE結(jié)果顯示酶蛋白的分子質(zhì)量未發(fā)生明顯變化;圓二色譜和表面疏水性的結(jié)果表明其α-螺旋與β-折疊向β-轉(zhuǎn)角和無規(guī)卷曲發(fā)生轉(zhuǎn)變,酶蛋白發(fā)生部分去折疊,使得疏水性氨基酸殘基暴露,導(dǎo)致蛋白表面疏水性增強(qiáng);內(nèi)源熒光光譜結(jié)果顯示HTU能夠使PPO的熒光強(qiáng)度發(fā)生猝滅,最大發(fā)射波長發(fā)生紅移。因此推測HTU可能是通過改變PPO的空間結(jié)構(gòu)影響酶的活性。
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