領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
為探尋我國特有的復(fù)雜微生態(tài)環(huán)境——濃香型酒醅樣品總RNA提取方法，本實(shí)驗(yàn)建立了一種改良的十二烷基硫酸鈉（sodium dodecyl sulfate，SDS）-苯酚法，并從提取成本及耗時、RNA質(zhì)量濃度和純度、電泳結(jié)果、反轉(zhuǎn)錄效果及高通量測序分析5 個方面，比較其與試劑盒法、Trizol法、十六烷基三甲基溴化銨（hexadecyl trimethyl ammonium bromide，CTAB）法和月桂酸鈉法提取酒醅樣品總RNA的效果。結(jié)果表明，SDS-苯酚法和CTAB法成本較低，試劑盒法成本最高但耗時最短；試劑盒法提取的總RNA質(zhì)量濃度最高，分別約為SDS-苯酚法、Trizol法、CTAB法和月桂酸鈉法的1.84、2.33、19.14 倍和3.09 倍；SDS-苯酚法和試劑盒法提取樣品總RNA的OD260 nm/OD280 nm和OD260 nm/OD230 nm均分別大于1.8和2.0；SDS-苯酚法電泳條帶完整性優(yōu)于其他方法，CTAB法無法檢測到電泳條帶。SDS-苯酚法、試劑盒法和Trizol法所提取的RNA能有效反轉(zhuǎn)錄為cDNA并將其用于高通量測序分析，3 種方法所得優(yōu)勢微生物種屬（Lactobacillus和Clostridium）及不同發(fā)酵節(jié)點(diǎn)酒醅之間的微生物群豐度變化情況基本一致，其中SDS-苯酚法獲得的微生物群落多樣性最高，且能較好地反映不同酒醅間微生物類群的差異；Trizol法和試劑盒法均能偏好性地多獲得1 個屬，但其含量均很低（0.01%）。本研究系統(tǒng)地比較了5 種常見的總RNA提取方法在濃香型酒醅RNA提取的應(yīng)用效果，其中本研究建立的改良SDS-苯酚法具有一定的綜合優(yōu)勢，為今后以RNA為基礎(chǔ)的酒醅分子生物學(xué)研究提供理論依據(jù)，同時對其他富含糖、腐殖質(zhì)及酚類等雜質(zhì)的環(huán)境樣品RNA提取具有較好的借鑒意義。
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