為準(zhǔn)確檢測大豆過敏原,篩查驗證表征5 類主要大豆過敏原蛋白的特征肽段,建立基于超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的大豆主要過敏原檢測方法。優(yōu)化樣品總蛋白提取方法,將大豆蛋白經(jīng)測序級胰蛋白酶酶解后,利用超高效液相色譜-四極桿-飛行時間質(zhì)譜對酶解產(chǎn)物進(jìn)行分析,結(jié)合Uniprot數(shù)據(jù)庫完成計算機(jī)檢索,針對性地鑒定24 種大豆樣品的11 種主要過敏原(大豆球蛋白的G1、G2、G3、G4和G5亞基、β-伴大豆球蛋白的α’、α和β亞基、Gly m Bd 30K、Gly m Bd 28K及Kunitz型胰蛋白酶抑制劑)的多肽片段,并從中挖掘用以表征各過敏原的肽段,最終得到29 條響應(yīng)值高、重復(fù)性好的適于質(zhì)譜檢測的特征肽段;進(jìn)一步利用高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測模式對這些特征肽段進(jìn)行驗證,發(fā)現(xiàn)這些肽段的特異性、靈敏度和穩(wěn)定性均符合質(zhì)譜檢測要求,可為食品中大豆過敏原的全面、準(zhǔn)確檢測提供一定的理論基礎(chǔ)和技術(shù)支持。
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