領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
從呋喃它酮代謝物5-嗎啉甲基-3-氨基-2-惡唑烷基酮（5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxazolidinone，AMOZ）衍生物單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞中克隆抗體重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)基因，通過(guò)(G1y4Ser)3連接肽采用重疊延伸聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)構(gòu)建單鏈抗體基因，pET-22b（＋）表達(dá)載體進(jìn)行表達(dá)，Ni親和柱進(jìn)行純化，制備得到抗AMOZ衍生物單鏈抗體，采用棋盤滴定實(shí)驗(yàn)優(yōu)化包被原包被濃度和單鏈抗體稀釋度，建立基于此單鏈抗體的AMOZ殘留間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析方法并對(duì)方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果表明：最佳包被抗原質(zhì)量濃度和單鏈抗體稀釋度分別為0.062 5 μg/mL和20 倍；建立的間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析方法半抑制濃度為8.65 μg/L，線性范圍為2.90～53.28 μg/L，檢測(cè)限為1.48 μg/L；除與原藥呋喃它酮有交叉反應(yīng)外，此單鏈抗體與其他硝基呋喃類抗生素及其代謝物交叉反應(yīng)率均小于0.1%，蝦肉樣品添加回收率為74.3%～86.6%；用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)免疫測(cè)定結(jié)果進(jìn)行確證實(shí)驗(yàn)，兩種方法相關(guān)性良好（R2＝0.999 2），說(shuō)明建立的間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析方法可用于蝦類等水產(chǎn)品中AMOZ殘留的快速篩查。
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