硫辛酸(lipoic acid,LA)和白藜蘆醇(resveratrol,RES)是兩種重要的天然抗氧化活性因子,具有很好的抗氧化能力;對乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)是一種常見的解熱鎮(zhèn)痛藥物,其過量可能導致氧化應激和肝臟損傷。本實驗以體外細胞模型研究LA和RES對APAP引起的肝細胞損傷的抗氧化作用,并初步探討其抗氧化機制,為APAP所致肝損傷的防治提供技術依據。首先通過APAP誘導建立HepG2細胞肝損傷模型;并采用CCK-8法檢測不同濃度LA和RES對APAP誘導的HepG2細胞損傷的影響;運用細胞抗氧化活性法(cellular antioxidant activity,CAA)比較LA和RES的抗氧化活性;運用流式細胞術對細胞凋亡情況進行檢測;酶標法檢測丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量以及谷胱甘肽(glutathione,GSH)質量濃度和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活力;實時熒光定量聚合酶鏈式反應(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)和Western blot技術檢測凋亡相關基因Bax、Bcl-2、caspase-3的表達。CCK-8結果顯示LA和RES均可提高APAP所致的氧化損傷的細胞活力,且LA比RES效果更明顯;CAA結果顯示LA抑制二氯熒光(dichlorofluorescein,DCF)生成的能力比RES強;流式結果表明LA和RES均可抑制氧化應激引起的細胞凋亡,且LA組比RES組抑制效果更明顯;酶標法檢測結果和qPCR以及Western Blot結果均表明LA和RES是通過降低MDA含量,提高GSH和SOD活力,上調Bcl-2表達量,下調Bax和caspase-3表達量來抑制APAP引起的細胞凋亡,且LA比RES抑制效果更明顯。綜上,對于APAP引起的肝損傷,LA比RES起到的保護作用更明顯;其對APAP引起的肝損傷保護作用機制與減輕氧化應激反應和抑制細胞凋亡有關。
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