以藍莓為原料,采用超聲-閃式聯(lián)合法提取花色苷,探究超聲功率、閃提轉(zhuǎn)速、提取時間、料液比和乙醇體積分數(shù)對花色苷含量的影響。在單因素試驗的基礎(chǔ)上,利用遺傳算法優(yōu)化超聲-閃式聯(lián)合法提取藍莓花色苷的工藝參數(shù)。體外實驗采用MTT法和Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)記染色法探究不同質(zhì)量濃度花色苷提取物對S180細胞增殖和凋亡的影響;體內(nèi)實驗利用S180荷瘤小鼠模型和酶聯(lián)免疫吸附測定法探究花色苷提取物的抗腫瘤活性及其機制。結(jié)果表明:超聲-閃式聯(lián)合法提取藍莓中花色苷的優(yōu)化工藝參數(shù)為提取時間10 min、超聲功率450 W、閃提轉(zhuǎn)速8 400 r/min、料液比1∶30(g/mL)和乙醇體積分數(shù)68%,在此條件下花色苷含量和純度分別為(2.71±0.08)mg/g和(31.79±0.53)%。體外實驗發(fā)現(xiàn)花色苷提取物能有效抑制S180細胞增殖,誘導(dǎo)S180細胞凋亡,使細胞阻滯于S期。荷瘤小鼠體內(nèi)抑制腫瘤實驗表明:花色苷提取物低、中、高劑量組瘤體質(zhì)量顯著低于模型對照組(P<0.05),抑瘤率分別為26.36%、33.33%、46.51%;花色苷提取物低、中、高劑量組荷瘤小鼠血清中的IL-12和TNF-α含量顯著高于模型對照組(P<0.05),而IL-10含量顯著低于模型對照組(P<0.05)。綜上,超聲-閃式聯(lián)合提取法是一種高效的花色苷提取方式,所得的花色苷提取物可通過誘導(dǎo)細胞凋亡和增強機體免疫抑制腫瘤生長。
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