為了探明綠豆肽級分與其免疫活性的關(guān)系,本實驗采用葡聚糖凝膠G-15層析柱對綠豆肽進行分級,并將得到的3 個級分綠豆肽進行巨噬細胞增殖率、糖原含量、核酸含量以及細胞因子等免疫活性指標測定,以此優(yōu)化出具有較高免疫活性的綠豆肽,并對其氨基酸序列進行鑒定。結(jié)果表明,不同級分綠豆肽可促進巨噬細胞增殖,其中MBPH-3級分綠豆肽促進效果最佳,相比空白組增殖率提高9.05%。同時發(fā)現(xiàn)不同級分綠豆肽可促進糖代謝以及核酸含量的升高,上調(diào)巨噬細胞細胞因子(白細胞介素-6、白細胞介素-1β、腫瘤壞死因子-α)表達量,其中MBPH-3級分綠豆肽的白細胞介素-6、白細胞介素-1β、腫瘤壞死因子-α表達水平分別為1?566.47、593.32、828.13?pg/mL,相比空白組(136.55、139.61、436.18?pg/mL)差異顯著(P<0.05);同時不同級分綠豆肽又可抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)誘導的巨噬細胞分泌細胞因子,腫瘤壞死因子-α、白細胞介素-1β、白細胞介素-6分泌量分別為2?152.94、1?058.81、859.96?pg/mL,相比LPS刺激組(2?923.19、3?707.09、2?880.74?pg/mL)具有明顯的抑制效果。綜上所述,MBPH-3綠豆肽免疫效果最佳,結(jié)構(gòu)鑒定結(jié)果表明,MBPH-3的平均分子質(zhì)量約903?Da,氨基酸序列為Asn-Asn-Tyr-Gly-Pro-Thr-Met。
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