目的:建立一種快速鑒定肉及肉制品中馬源性成分的重組酶介導鏈置換等溫擴增實時檢測方法。方法:以馬源性ATpase 6基因為靶基因設計多組特異性引物和Exo探針,通過引物篩選及反應參數(shù)優(yōu)化,建立一種采用重組酶介導鏈置換等溫擴增技術檢測馬源性成分的方法,并對該方法進行特異性、靈敏度和穩(wěn)定性驗證,同時通過對不同摻入比例混合樣品、不同加工工藝模擬樣品和市售樣品進行檢測,分析方法的檢出限、適用性和準確性。結果:該方法反應迅速、特異性強、靈敏度高。可在39 ℃恒溫條件下16 min內完成反應;對23 種非目標源性具有良好特異性;目標DNA的檢測靈敏度可達到1.8 copies/μL水平;對生肉的檢出限為0.01%(質量分數(shù),下同),對熟肉制品的檢出限為0.1%;對90 份市售樣品進行檢測,結果與標準方法一致。結論:建立的重組酶介導鏈置換等溫擴增方法可用于肉及肉制品中馬源性成分的摻假鑒別檢測。
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