為探究脯氨酰內(nèi)肽酶(prolyl endopeptidase,PEP)在骨膠原蛋白肽酶法制備過程中的應用潛力,分別以牛骨膠原蛋白(bovine bone collagen,BBC)、豬骨膠原蛋白(porcine bone collagen,PBC)、雞骨膠原蛋白(chicken bone collagen,CBC)為原料,對比分析3 種不同來源骨膠原蛋白的序列特征,預測不同骨膠原蛋白潛在的酶解作用位點和理論水解度。在55 ℃、pH 8.0條件下,利用PEP水解處理3 種不同來源骨膠原蛋白,通過水解度、分子質量分布測定和掃描電子顯微鏡觀察等方法進行表征。利用紅外光譜、X射線衍射和圓二色光譜等方法探究酶解過程中膠原蛋白結構變化。結果表明,PEP對3 種不同來源骨膠原蛋白均有顯著水解效果,PBC的水解度最高,為51.35%,其次分別為CBC(29.81%)和BBC(22.81%)。3 種骨膠原蛋白酶解產(chǎn)物分子質量多分布在500 Da以下。光譜學分析表明PEP破壞了膠原蛋白的三螺旋結構,從而使膠原蛋白降解,達到制備膠原蛋白肽的效果。PEP可以高效酶解骨膠原蛋白制備小分子蛋白肽,本研究可為功能性骨膠原蛋白肽的酶法制備提供依據(jù)。
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