目的:探究海灣扇貝肽的抗氧化作用以及對乙醇誘導(dǎo)的酒精性肝損傷小鼠的保護作用及機制。方法:采用兩步酶解和膜分離制備低分子質(zhì)量海灣扇貝肽,通過體外抗氧化實驗以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、乙醇脫氫酶(alcohol dehydrogenase,ADH)激活率實驗評價其體外抗氧化性以及促進乙醇代謝潛力;通過急性酒精中毒模型小鼠,測定其血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase,AST)活力,肝臟中ADH、乙醛脫氫酶(acetaldehyde dehydrogenase,ALDH)、谷胱甘肽過氧化酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、過氧化氫酶(catalase,CAT)、SOD活力及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,評價其對小鼠酒精性肝損傷的保護作用及機制。采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)法分析多肽序列,通過PeptideRanker工具和AnOxPePred 1.0工具進行多肽的潛在生物活性預(yù)測,并將抗氧化活性最強的肽段與ALDH進行分子對接分析。結(jié)果:所制得海灣扇貝活性肽分子質(zhì)量在200~1 000 Da的肽段占比為70.38%,抗氧化氨基酸占總氨基酸含量的68.75%。體外實驗顯示,海灣扇貝肽1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基和羥自由基清除率的半抑制濃度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值分別為19.43 mg/mL和4.53 mg/mL,亞鐵離子螯合能力的IC50值為2.19 mg/mL;在海灣扇貝酶解液質(zhì)量濃度為5 mg/mL時,SOD和ADH激活率分別為19.83%和18.18%,顯示出良好的抗氧化活性和解酒潛力。體內(nèi)實驗結(jié)果顯示,海灣扇貝肽能顯著降低小鼠血清中ALT、AST水平,顯著提升ADH、ALDH、GSH-Px、SOD和CAT活力,并顯著降低MDA含量。利用PeptideRanker工具和AnOxPePred 1.0工具對鑒定出的44 條多肽進行篩選,有6 條達到分子對接篩選的標(biāo)準(zhǔn),分子對接發(fā)現(xiàn)其與ALDH均具有強烈的結(jié)合能力,其中DQPHFPF和YSTHPHF、ALDH之間分別形成了7、3 個氫鍵,可以通過與ALDH發(fā)生分子相互作用激活其活性。結(jié)論:本研究為海灣扇貝肽在解酒護肝產(chǎn)品中的應(yīng)用提供了理論參考。
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