領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
為了提高酵母菌的γ-氨基丁酸產(chǎn)量，本研究以十六烷基三甲基溴化銨法（hexadecyl trimethy ammoniumbromide，CTAB）提取的釀酒酵母28基因組DNA為模板，擴(kuò)增得到序列長度為1 758 bp的GAD1基因，經(jīng)比對與S. cerevisiae S288c的一致性達(dá)到98.58%，并設(shè)計引物擴(kuò)增包括GAD1基因上游啟動子及調(diào)控序列，下游終止子在內(nèi)的全長基因序列，長度為3 490 bp。將全長基因序列克隆至高拷貝質(zhì)粒pUG6，構(gòu)建重組質(zhì)粒p28。以菌株28作為出發(fā)菌株進(jìn)行轉(zhuǎn)化，經(jīng)G418抗性篩選得到轉(zhuǎn)化子，進(jìn)一步經(jīng)過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）實驗驗證，質(zhì)粒提取及酶切驗證，確證得到重組子DL28。經(jīng)重組質(zhì)粒p28的特性研究得知，重組質(zhì)粒p28具有良好的遺傳穩(wěn)定性，無抗性傳代培養(yǎng)10 次重組質(zhì)粒不丟失。轉(zhuǎn)化后進(jìn)行酶活力測定，重組子DL28的谷氨酸脫羧酶（glutamic acid decarboxylase，GAD）酶活力比菌株28提高73.8%。通過以上實驗結(jié)果得出結(jié)論，GAD基因高表達(dá)菌株DL28具有更高的G418抗性和GAD酶活性。
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