沈立榮教授—基于蜂王漿主蛋白超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的蜂蜜真實性和蜂王漿新鮮度精準(zhǔn)定量檢測研究
2023-10-23 22:23:05
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報告標(biāo)題：
基于蜂王漿主蛋白超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的蜂蜜真實性和蜂王漿新鮮度精準(zhǔn)定量檢測研究
蜂王漿是由5～15 日齡工蜂頭部營養(yǎng)腺分泌的內(nèi)源性活性物質(zhì)，其中的王漿主蛋白（major royal jelly proteins，MRJPs）是王漿和蜂蜜等蜂產(chǎn)品中的特異性蛋白，適合作為蜂蜜真實性和蜂王漿新鮮度鑒定的內(nèi)源性生物標(biāo)志物。然而，對蜂蜜和蜂王漿中的MRJPs的精準(zhǔn)定量研究尚未見報道。為建立精準(zhǔn)的蜂蜜真實性和蜂王漿新鮮度檢測方法，利用超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿飛行時間質(zhì)譜（ultra-high performance liquid chromatography-tandem quadrupole-time-of-flight mass spectrometry，UPLC-Q-TOF/MS）對經(jīng)胰蛋白酶酶解的蜂王漿中的王漿主蛋白進(jìn)行定性分析，并通過蛋白質(zhì)組學(xué)分析平臺比對，鑒定出8 種王漿主蛋白（MRJP1～7和MRJP9）的一級序列數(shù)據(jù)，然后按同時具備高易酶解性與酶解后高穩(wěn)定性的標(biāo)準(zhǔn)篩選得到3 個特異性標(biāo)志多肽，包括MRJP1多肽YNGVPSSLNVISK、MRJP2 多肽TLQMIAGMK、MRJP3多肽LTVAGESFTVK。分別合成MRJP1～3的3 條特異性標(biāo)志多肽標(biāo)準(zhǔn)品及其同位素標(biāo)志肽，建立蜂蜜和蜂王漿中MRJP1～3的超高效液相色譜-串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜（ultra-high performance liquid chromatography-triplequadrupole tandem mass spectrometry，UPLC-TQMS）定量檢測方法。采用UPLC-TQMS分別檢測蜂王漿樣品中MRJP1～3含量發(fā)現(xiàn)，MRJP1多肽在10～1 600 ng/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，MRJP2和MRJP3多肽在10～600 ng/mL范圍內(nèi)均具有良好的線性關(guān)系，決定系數(shù)（R2）均大于0.99。最后，進(jìn)行了應(yīng)用和驗證研究。1）通過對70 份蜂蜜真品的定量分析，建立了蜂蜜MRJP1～3含量數(shù)據(jù)庫，所有蜂蜜樣品中MRJP1、MRJP2和MRJP3的含量分別在37.9～212.6、13.8～78.0 μg?1和15.2～91.5 μg?1之間。MRJP1是所有蜂蜜樣品中MRJPs中最豐富的成員。MRJP1～3總含量為66.8～382.1 μg?1。MRJP1、MRJP2、MRJP3及MRJP1～3總含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）在47.8%～23.4%之間。參考正宗蜂蜜MRJP1～3數(shù)據(jù)庫，采用UPLC-TQMS對10 份商品蜂蜜樣品的分析結(jié)果進(jìn)行比較，并采用AOAC官方方法同位素比質(zhì)譜法進(jìn)行了驗證。2）通過分析蜂王漿中MRJP1～3隨加溫老化時間的降解程度，證實MRJP1～3的降解率均與老化時間（40 ℃）呈正相關(guān)（R2＞0.9）；在40 ℃條件下貯存35 d后，MRJP1、MRJP2、MRJP3的含量分別為（27.1±0.7）、（2.0±0.1）、（5.1±0.1）mg/g，相對于0 d的鮮蜂王漿中MRJP1、MRJP2、MRJP3的含量（分別為（56.9±6.1）、（16.0±0.6）、（26.8±0.5）mg/g），三者的降解率分別為52.4%、87.8%、81.1%。本研究所建立的MRJP1～3檢測方法具有高度特異性，可為蜂蜜真實性的真實性鑒定、蜂王漿新鮮度質(zhì)量評價提供技術(shù)支撐。
沈立榮 教授
浙江大學(xué)生物系統(tǒng)工程與食品科學(xué)學(xué)院
美國哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院和農(nóng)業(yè)部駐塔芙茨大學(xué)人類老年化研究中心訪問學(xué)者（博士后），浙江大學(xué)食品科學(xué)與營養(yǎng)系教授。學(xué)術(shù)兼職主要包括美國營養(yǎng)學(xué)會會員、北美華人營養(yǎng)學(xué)會理事和聯(lián)絡(luò)委員會主委、亞太臨床營養(yǎng)學(xué)會會員、亞太素食聯(lián)盟委員；中國營養(yǎng)學(xué)會營養(yǎng)轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)分會常務(wù)理事、浙江省食品安全專家委員會專家、浙江省食品科技學(xué)會理事、杭州市科協(xié)常委、杭州市食品藥品安全應(yīng)急專家委員會副主任、杭州市食品營養(yǎng)學(xué)會理事長，Food Science and Human Wellness、Journal of Future Foods、Food and Nutritional Science、BioFactors等國際期刊編委。歷年來出訪了美國、加拿大、日本、韓國、泰國、馬來西亞、保加利亞、羅馬尼亞、塞爾維亞等國；出席過美國營養(yǎng)學(xué)會大會、國際營養(yǎng)科學(xué)聯(lián)盟大會、亞太臨床營養(yǎng)學(xué)會大會、國際素食聯(lián)盟和亞太素食聯(lián)盟、亞洲營養(yǎng)大會等國際會議，并報告交流；組織舉辦過“2009國際營養(yǎng)基因組學(xué)合作論壇”、“2011杭州飲食營養(yǎng)與人類健康國際合作論壇”、“杭州食品與健康國際合作論壇暨哈佛大學(xué)脂類研究中心歸國留學(xué)人員學(xué)術(shù)交流會”（2015），“營養(yǎng)與慢病預(yù)防”暨“微量元素及植物化學(xué)物與健康”國際學(xué)術(shù)論壇（2016），“中國-中東歐國家農(nóng)業(yè)和食品科技及貿(mào)易合作論壇”（2017），“體醫(yī)融合主動健康與產(chǎn)業(yè)發(fā)展論壇”（大會執(zhí)行主席，2022）、“首屆食藥同源功能食品與健康國際論壇“（大會執(zhí)行主席，2023）。 長期從事食品營養(yǎng)健康與食品安全基礎(chǔ)研究和應(yīng)用開發(fā)工作，特別是在蜂王漿、蜂蜜、山茶油、姜黃的營養(yǎng)健康功能、質(zhì)量檢測技術(shù)領(lǐng)域取得了突出成就，如研究制訂了美國藥典委批準(zhǔn)發(fā)布的《美國食品化學(xué)法典標(biāo)準(zhǔn)-油茶籽油》，在國際上率先研發(fā)成功免冷凍保存的蜂王漿主蛋白產(chǎn)業(yè)化技術(shù)和產(chǎn)品，通過動物實驗證實了促生殖和改善內(nèi)分泌功能，在臨床上開始應(yīng)用于不孕不育和婦女更年期綜合癥。主持“863計劃”、國家自然科學(xué)基金、浙江省和杭州市重大科技專項、浙江省公益性計劃項目和自然科學(xué)基金項目等，國家科技支撐子項、國家重點(diǎn)研發(fā)計劃項目子課題、新疆建設(shè)兵團(tuán)重大科技項目子項等項目。近年來的主要研究內(nèi)容包括：蜂王漿主蛋白的抗衰老作用及分子機(jī)制研究、基于蜂王漿功能蛋白分子機(jī)制創(chuàng)新研究的抗衰老保健食品產(chǎn)業(yè)化示范、山茶油功能評價與精深加工、以內(nèi)源性特異蛋白為標(biāo)記物的蜂蜜真?zhèn)舞b別技術(shù)研究與快速檢測試劑開發(fā)、反食品欺詐庫構(gòu)建與食品鏈脆弱性評估技術(shù)研究、新疆梨、核桃、棗果實功能性成分形成機(jī)制及關(guān)鍵基因挖掘。曾獲美國藥典委銀獎、全國優(yōu)秀科普作品獎、浙江省科技進(jìn)步一等獎、浙江省科技進(jìn)步二等獎（第二）、梁希林業(yè)科學(xué)技術(shù)獎科技進(jìn)步二等獎、浙江省百名科技追夢人等榮譽(yù)。已發(fā)表SCI收錄論文60余篇。獲得授權(quán)發(fā)明專利20 項。
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