
以克氏擔(dān)孢酵母V3脂肪酶基因為研究對象,構(gòu)建畢赤酵母穩(wěn)定的高效表達(dá)系統(tǒng)。采用同源克隆法從克氏擔(dān)孢酵母V3中獲得一個脂肪酶基因,并將其構(gòu)建到表達(dá)載體pPICZαA,轉(zhuǎn)入畢赤酵母X33中,成功實現(xiàn)了克氏擔(dān)孢酵母V3脂肪酶基因在畢赤酵母X33中的表達(dá)。重組工程菌搖瓶培養(yǎng)120 h后,酶活力可達(dá)18 U/mL。重組酶的最適反應(yīng)溫度為60 ℃,最適pH值為5.0。1 mmol/L的Mg2+、K+和Na+以及質(zhì)量濃度為1 g/100 mL的曲通-100、吐溫-80、吐溫-20對重組KLIP具有激活作用。重組酶的最適底物為三硬脂酸甘油酯(C18)。
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