為了建立食品中肺炎克雷伯氏菌靈敏快速的檢測方法,根據(jù)GenBank中已公布的肺炎克雷伯氏菌phoE基因設(shè)計引物,利用實(shí)時熒光監(jiān)測儀,建立實(shí)時熒光環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技術(shù)檢測食品中肺炎克雷伯氏菌的方法,可直觀判定檢測結(jié)果,儀器亦可自動顯示檢測結(jié)果。對該檢測方法的特異性、靈敏度等方面進(jìn)行研究,并與聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)檢測方法進(jìn)行比較。結(jié)果表明,實(shí)時熒光LAMP檢測方法特異性強(qiáng)、靈敏度高。用于特異性實(shí)驗(yàn)的21 株實(shí)驗(yàn)菌株中,4 株肺炎克雷伯氏菌,呈現(xiàn)陽性結(jié)果,而其他17 株非肺炎克雷伯氏菌,均呈陰性結(jié)果;檢測純菌的靈敏度和檢測人工污染乳粉的檢出限分別為79 CFU/mL和79 CFU/g,是常規(guī)PCR檢測方法的100 倍。總之,本研究建立的實(shí)時熒光LAMP檢測方法靈敏度高、特異性強(qiáng)、耗時短、結(jié)果判定直觀,實(shí)現(xiàn)了對肺炎克雷伯氏菌的快速檢測。
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