目的:建立快速、靈敏檢測大腸桿菌O157:H7熒光微球免疫層析試紙條法。方法:以羧基化熒光微球作為標記物,共價偶聯(lián)抗大腸桿菌O157:H7鼠源單克隆抗體,將大腸桿菌O157:H7兔多抗和驢抗鼠抗體噴涂于硝酸纖維素膜分別作為檢測線和質(zhì)控線,以雙抗體夾心反應模式制備大腸桿菌O157:H7熒光微球免疫層析試紙條。結果:通過優(yōu)化實驗確定偶聯(lián)緩沖液為0.02mol/L pH5.0磷酸鹽緩沖液,抗體偶聯(lián)微球量為100μg/mg,試紙條可在加樣5min后判讀結果。制備的熒光微球試紙條對純培養(yǎng)大腸桿菌O157:H7進行檢測,肉眼觀察檢測限在1.2×104CFU/mL,借助熒光讀取儀檢測限能提高到6.1×103CFU/mL。試紙條除與金黃色葡萄球菌有微弱交叉反應外,與實驗室保存的30株細菌無交叉反應。結論:大腸桿菌O157:H7熒光微球試紙條具有操作簡便、快速靈敏、易于量化的特點,為該菌的檢測提供了一種新型的手段。
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