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大豆根部兩株產(chǎn)植酸酶菌的分離鑒定及中性植酸酶基因的克隆
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 132 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 姚明澤,盧文亮,張耀華,梁愛華
關(guān)鍵詞: 植酸酶基因;克隆;酶學(xué)性質(zhì);芽孢桿菌
摘要:

從大豆根部土壤中篩選到兩株產(chǎn)植酸酶的細(xì)菌菌株,對其進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析和16S rRNA鑒定,確定兩個(gè)菌株為枯草芽孢桿菌,并對其植酸酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行初步研究。通過PCR方法從該芽孢桿菌基因組中克隆了植酸酶基因phy(ycD)和phy(ycE)。與NCBI已報(bào)道的植酸酶序列分別通過BLASTn和BLASTp程序進(jìn)行比對,確定phy(ycD)和phy(ycE)屬于β-螺旋槳植酸酶家族。兩個(gè)植酸酶核酸序列同源性達(dá)到98%。兩個(gè)基因的開放閱讀框(ORF)均為1149個(gè)核苷酸,編碼382個(gè)氨基酸。N端26個(gè)氨基酸為信號肽序列,整個(gè)酶分子有5個(gè)氨基酸不同,運(yùn)用SWI SS-MODEL服務(wù)器進(jìn)行同源建模,使用Spdbv軟件對其三維結(jié)構(gòu)評估,這5個(gè)氨基酸中的4個(gè)分別處在酶分子不同二級結(jié)構(gòu)部位。β-螺旋槳植酸酶基因phy(ycD)和phy(ycE)的獲得,為進(jìn)一步探討中性植酸酶的結(jié)構(gòu)與功能以及該類植酸酶的產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

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