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產(chǎn)β-葡萄糖苷酶真菌的篩選鑒定、純化及酶學(xué)性質(zhì)分析
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 167 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 陳 靜,郝偉偉,王春梅,陳 惠,吳 琦,韓學(xué)易
關(guān)鍵詞: 米曲霉;β-葡萄糖苷酶;純化;酶學(xué)性質(zhì)
摘要:

經(jīng)剛果紅平板染色法從土樣中篩選到3株產(chǎn)纖維素酶的真菌,通過對(duì)其β-葡萄糖苷酶活力的測定,選擇一株相對(duì)活力較高的菌株進(jìn)行菌種鑒定。在形態(tài)鑒定的基礎(chǔ)上,通過內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹初步鑒定為米曲霉(Aspergillus oryzae),命名為giF-10。對(duì)米曲霉giF-10進(jìn)行搖瓶發(fā)酵,經(jīng)硫酸銨沉淀、Sephadex G-100凝膠層析、DEAE Cellulose 52離子交換層析進(jìn)行純化。得到純化后的β-葡萄糖苷酶,比活力為40.84U/mg,分子質(zhì)量約90kD;該β-葡萄糖苷酶最適溫度為55℃;在30~50℃之間熱穩(wěn)定性好;最適pH值為4.5;pH4.0~6.0穩(wěn)定性好;金屬離子對(duì)酶活力具有一定的影響,Mn2+對(duì)酶具有較強(qiáng)的激活作用;Fe3+和Cu2+對(duì)β-葡萄糖苷酶活力有較強(qiáng)的抑制作用;該酶對(duì)水楊素和纖維二糖具有較強(qiáng)的底物特異性;β-葡萄糖苷酶對(duì)水楊素的動(dòng)力學(xué)參數(shù):Km為0.676mmol/L;對(duì)纖維二糖的動(dòng)力學(xué)參數(shù)為:Km為2.906mmol/L。

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