建立適用于從重組E.coli中提取重組脂肪氧合酶非機械法的破碎條件。采用化學滲透法、凍融法和酶解法破碎重組E.coli細胞,并采用單因素試驗和L25(56)正交試驗對細胞破碎條件進行優(yōu)化。結果表明:溶菌酶添加量為1.5mg/mL、溶菌酶處理時間40min、乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)添加量為2.0mmol/L、吐溫-60添加量為2%、凍融溫度(-70℃冷凍37℃融解)、凍融次數(shù)3次,效果最佳,獲得粗酶液的脂肪氧合酶(LOX)酶活力為6840U/mL,比優(yōu)化前(4750U/mL)提高了0.44倍;并在此條件下,比較分光光度法、碘化鉀-淀粉法和二甲苯酚橙法測定LOX酶活力,其中碘化鉀-淀粉法簡單、靈敏、快速,且測定體系具備肉眼可辨的特征顏色,可用于LOX酶活性高通量篩選。
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