領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
采用粟酒裂殖酵母誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行綠色木霉纖維二糖水解酶基因cbhⅡ的表達(dá)研究。通過PCR方法從綠色木霉基因組DNA中克隆到長度為1611bp并含有信號肽序列的cbhⅡ基因；將其插入到粟酒裂殖酵母誘導(dǎo)型表達(dá)載體pESP-2的Pnmt1啟動子下游，得到重組質(zhì)粒pESP-2-cbhⅡ；利用電轉(zhuǎn)化方法將其轉(zhuǎn)入粟酒裂殖酵母SP-Q01細(xì)胞中，通過對酵母轉(zhuǎn)化子質(zhì)粒DNA的PCR和雙酶切鑒定，得到了含有cbhⅡ基因的酵母轉(zhuǎn)化子，對轉(zhuǎn)化子進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)后提取酵母總蛋白，進(jìn)行SDS-PAGE電泳檢測，得到一條約為81kD的目的蛋白條帶；利用DNS法對酵母轉(zhuǎn)化子上清液中的纖維二糖水解酶活性進(jìn)行測定，結(jié)果表明，酶活力最大值為165U/mL。以上結(jié)果證明：cbhⅡ基因在Pnmt1啟動子控制下在粟酒裂殖酵母中成功地獲得表達(dá)，并且cbhⅡ自身的信號肽可以被粟酒裂殖酵母正確的識別，并將表達(dá)產(chǎn)物分泌至胞外。
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