采用Sepharose CL-4B和7種大孔樹(shù)脂為載體固定Palatase 20000L脂肪酶,對(duì)載體進(jìn)行篩選,以酶活力為指標(biāo),采用響應(yīng)面法優(yōu)化固定化條件,并考察所制得固定化酶的穩(wěn)定性和水解橄欖油的酶學(xué)性質(zhì)。結(jié)果表明:以大孔樹(shù)脂HPD-600為載體制得的固定化酶具有較高的活性和良好的穩(wěn)定性。其最優(yōu)的固定化條件為:pH3.9,酶與載體比例為9.1mg/g,吸附時(shí)間1.8h。在最優(yōu)條件下制得固定化酶在最適合條件下測(cè)得的酶活力達(dá)到1440U/g,酶活回收率大于50%。固定化酶最適作用溫度為50℃,最適作用pH值為8.0。固定化酶的Km值為0.130g/mL,高于游離酶的Km(0.069g/mL)。固定化酶的熱穩(wěn)定性有一定程度的提高,其重復(fù)操作5次后相對(duì)酶活力仍保持在58%以上。
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