建立一種木聚糖酶活力的微量測定新方法--3-甲基-2-苯并噻唑酮腙(MBTH)法。根據(jù)木聚糖及其酶解產(chǎn)物的特殊性,研究MBTH法的顯色條件,并以多點測定法對酶活力測定中的幾個關鍵參數(shù)進行探討。結(jié)果表明:蛋白質(zhì)在其質(zhì)量濃度低于30μg/mL時對測定無干擾;木聚糖溶液的最佳測定質(zhì)量濃度為4mg/mL;較高的酶解溫度會使木聚糖酶在測定過程中失活,因此,酶活力測定的最佳溫度為30℃,而遠低于該酶的最適溫度;酶解時間為60min以內(nèi);酶解產(chǎn)物與MBTH試劑的反應時間應控制在13~16min之間,以15min為最佳。以酶解時間為30min計,本法檢測限為0.135mU/mL,定量限為0.451mU/mL,適當延長酶解時間可相應提高酶活力檢測靈敏度。該法準確度高,結(jié)果穩(wěn)定,靈敏度遠高于DNS法。
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