實驗建立一種從蛋白水解物中快速高效鑒別血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACEI)的方法:先對蛋白按照酶解位點進行序列搜尋,建立一個樣品肽庫;在量效結(jié)構(gòu)關(guān)系(QSAR)研究的基礎(chǔ)上對樣品庫中的肽的ACE抑制活性進行預(yù)測,然后化學合成目標肽及測定活性;必要時用現(xiàn)代分析技術(shù)確證蛋白水解物中目標肽的存在。用此方法對油菜、大米、小麥蛋白水解物中三肽ACE抑制活性進行研究,發(fā)現(xiàn)IC50在10μmol/L以下的三肽多達34條,選擇了11條活性較高的肽合成驗證,最后發(fā)現(xiàn)潛藏在油菜Cruciferin BNC1 (P33523)蛋白序列347~349的LRL活性最高,IC50達到3.42μmol/L,且具有較好的穩(wěn)定性。抑制動力學研究表明,LRL屬于競爭性抑制劑;油菜蛋白胃蛋白酶水解物進行分子質(zhì)量分段,取分子質(zhì)量小于1000D部分進行高效液相色譜(HPLC)分析發(fā)現(xiàn)有LRL。
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