首先用碳二亞胺(EDC)法將新霉素(NEO)偶聯(lián)于載體蛋白-卵清白蛋白(ovalbumin,OVA),合成包被原OVA-NEO,SDS-PAGE 進行鑒定;用高碘酸鈉法連接辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP),制備酶標抗原NEO-HRP并建立直接ELISA檢測方法。通過一系列參數(shù)的優(yōu)化,包括包被溶液、封閉溶液、競爭時間、抗體稀釋液、pH值、反應溫度、顯色時間等,最終得到其IC20(抑制率為20%時的標準溶液質(zhì)量濃度)<1ng/mL、半數(shù)抑制量(IC50)為7.6ng/mL,線性方程為y =-0.2798x+0.7456,R2=0.991。直接ELISA總耗時只需大約1h。
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