建立高效液相色譜測定母乳和牛乳中總核苷酸含量和組成的分析方法。總核苷酸包括游離核苷酸、游離核苷、核苷聚合物及加合物等不同來源的可利用核苷總量。利用酶解法釋放出母乳中的核苷,以硼化聚丙烯酰胺凝膠(Affi-Gel 601)作為固相萃取介質(zhì)進行樣品凈化,用反相高效液相色譜儀檢測,內(nèi)標(biāo)法定量,檢測結(jié)果以核苷酸計。且針對母乳樣品的特性,增加高溫滅活步驟進行樣品前處理,以檢測母乳中核苷酸的天然含量及組成。對所建方法進行全面驗證,結(jié)果表明其具有良好的線性,相關(guān)系數(shù)(r2)均在0.999以上;母乳中各核苷酸的檢出限和定量限分別在0.18~0.45 mg/L和0.60~1.51 mg/L之間;母乳基質(zhì)中3 種不同加標(biāo)水平下總核苷酸的回收率均在99%~108%之間,連續(xù)3 d 6 次檢測結(jié)果的相對標(biāo)準偏差在0.8%~7.8%之間,顯示了良好的準確性及精密度。然后進一步利用所建檢測方法,評估母乳及5 種市面常見的牛乳中的核苷酸總量及組成用以驗證該方法的適用性。該方法的靈敏度、準確性及精密度均可滿足對母乳和牛乳樣品中天然的核苷酸含量及組成的測定要求。本研究為今后大樣本量調(diào)查母乳及牛乳樣品中核苷酸的含量和組成提供了更加科學(xué)準確的方法。
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