目的:利用抗脫氧雪腐鐮刀烯醇多克隆抗體及其人工抗原,采用時間分辨免疫熒光技術(shù)建立間接競爭脫氧雪腐鐮刀烯醇時間分辨免疫檢測方法(DON-TRFIA)。方法:以DON人工抗原(DON-BSA)包被微孔板,與DON標準或樣品中的DON共同競爭結(jié)合抗DON多克隆抗體,然后用稀土離子Eu3+標記羊抗兔抗體進行示蹤檢測,并對建立DON-TRFIA進行方法學(xué)的考核。結(jié)果:該方法的靈敏度為0.01ng/ml,檢測范圍為0.01~100ng/ml,IC50為4.84ng/ml,批內(nèi)、批間變異率均小于10%。不同樣品添加回收實驗表明小麥、玉米、啤酒、面包回收率分別為89.41%~123.2%、115.6%~123.6%、80.35%~118%、87%~92.45%。玉米樣品檢測結(jié)果表明DON-TRFIA與商品化DON-ELISA試劑盒結(jié)果高度相關(guān),具有較好的一致性。結(jié)論:DON-TRFIA是目前已見報道文獻中最靈敏的DON免疫檢測法,具有很好的應(yīng)用前景。
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