目的:對(duì)準(zhǔn)確分離植物內(nèi)生真菌的方法和適宜的培養(yǎng)條件進(jìn)行研究。方法:采用75% 乙醇、次氯酸鈉溶液(活性氯含量1.3%~5.2%)浸泡和無菌水洗滌工藝對(duì)植物材料進(jìn)行表面滅菌,以滅菌強(qiáng)度逐步遞減的方式,確定最佳分離植物內(nèi)生真菌的表面滅菌強(qiáng)度;設(shè)置超凈工作臺(tái)無菌狀態(tài)檢測(cè)對(duì)照、漂洗液無菌檢測(cè)對(duì)照和組織印跡無菌檢測(cè)對(duì)照3 種對(duì)照處理,確保適度的表面滅菌強(qiáng)度;采用不同的培養(yǎng)基分離培養(yǎng)內(nèi)生真菌。結(jié)果:高濃度殺菌劑短時(shí)間處理比低濃度殺菌劑長時(shí)間處理更適合植物內(nèi)生真菌的分離;使用10% 馬鈴薯葡萄糖雙抗培養(yǎng)基、22℃低溫培養(yǎng),能抑制快生型菌株的瘋長,從而使慢生型菌株擁有一定的生長空間,最大限度地分離所有植物內(nèi)生真菌;同時(shí)設(shè)置3 種對(duì)照處理可以確保植物內(nèi)生真菌分離的準(zhǔn)確性。結(jié)論:設(shè)計(jì)合適的表面滅菌方法、表面滅菌效果檢測(cè)方法和分離培養(yǎng)方法對(duì)植物內(nèi)生真菌的分離至關(guān)重要。
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