采用RT-PCR、RT- 半巢式PCR(seminested PCR)和RT- 環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增(LAMP)三種分子生物學(xué)方法分別檢測了牡蠣中經(jīng)糞便污染的諾如病毒。三種方法所采用的特異性引物均針對諾如病毒高度保守的N/S 結(jié)構(gòu)域。結(jié)果顯示:一步法RT-PCR較兩步法結(jié)果理想但仍不能有效去除食品中的PCR反應(yīng)抑制物。RT- 半巢式PCR和RT-LAMP的特異性和敏感性都遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于RT-PCR,但是RT- 半巢式PCR 操作繁瑣費(fèi)時。RT-LAMP 擴(kuò)增程序簡單、反應(yīng)時間短,且不需要精密的溫度循環(huán)裝置,在產(chǎn)物中加入SYBR Green Ⅰ染料后可用肉眼直接判斷反應(yīng)結(jié)果。因此,RT-LAMP 有望發(fā)展成為快速檢測牡蠣中諾如病毒的有效手段。
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